组织细胞如何彻底清洗

组织样品做 WB，血液不洗干净 → 会带来哪些影响？

1）背景变高，膜发暗

原因：血红蛋白（Hemoglobin）颜色深、容易黏到PVDF/NC膜上

→ 导致底色发灰、发暗

→ 弱信号的目标蛋白被淹没。

2）条带变浅 / 消失

原因：血红蛋白量特别高，会在转膜时“占据膜的结合位点”

→ 低丰度蛋白（尤其神经类蛋白）转不上去

→ 条带不出来。

3）出现非特异条带（actin 也会受影响）

原因：血液中的蛋白（尤其血红蛋白）带电、可与抗体产生弱结合

→ 抗体非特异结合增加

→ Actin/GAPDH 的条带变脏或多出杂带。

4）泳道弥散、出现拖尾

原因：血红蛋白容易氧化和聚集

→ 跑胶时扩散 → 泳道不直、拖尾、分辨率下降。

5）蛋白定量被干扰（BCA/Bradford 都不准）

原因：血红蛋白强吸光

→ 浓度测出来虚高

→ 上样量不一致

→ WB 结果完全不可比。

🧬 有哪些“血液里的成分”导致这些问题？（简化原理）

① 血红蛋白（Hb）——主要罪魁祸首

深色

膜黏附性强

含铁（容易氧化、产生非特异信号）

总量特别高（>90% 血液蛋白）

→ 背景高、条带浅、条带乱，全都是它。

② 血浆蛋白（Albumin、IgG 等）

高丰度

极易与抗体交叉反应

→ 非特异条带增加。

③ 红细胞残留的脂质/碎片

跑胶电泳时弥散

→ 泳道不直、条带模糊。

🧽 如何把组织里的血液“处理干净”？（简化版）

1）取组织前灌流（最有效）

减少血液残留。

2）组织剪碎后多次清洗（PBS）

直到不再有“粉红色”。

3）匀浆后加强离心，避免吸到红色层

尽量取上清的上层透明部分。

4）若血液较多，可用专门去血红蛋白试剂

原理：吸附血红蛋白，减少背景。

如何彻底洗掉组织里的血？（最实用简版）

适用组织：脑、肝、脾、肌肉、肿瘤组织

① 快速剪成小块（1–3 mm³）

目的：增大洗涤面积，血容易被冲掉。

② 冰冷 PBS 冲洗（3–5 次）

每次都：

用离心管加满 PBS

轻轻颠倒混匀 10–20 次

离心 500 g，1 分钟，倒掉上清

看见 PBS 不再变红，就是洗干净了。

③ 可选：去血增强法

方法 A：高盐 PBS（0.5M NaCl）冲洗 1 次

能更强力带走血浆蛋白。

方法 B：去血缓冲液（HBSS）

对脑组织特别好用，更温和。

④ 冷却处理非常重要

血液中的蛋白酶在温度高时更活跃。

所有步骤必须全程 4℃、冰浴、冰上操作。