从优品生物视角看：WB 抗体浓度的常规设定与调整

从优品生物接触的大量实验案例来看，WB 抗体浓度的常规设定需兼顾抗体类型、目标蛋白丰度及检测系统灵敏度，形成了相对稳定的参考范围。

一抗浓度的设定主要取决于抗体来源与特异性：单克隆抗体因靶向性强、亲和力高，常规浓度多设定在 0.1-5 μg/mL（稀释比例约 1:1000-1:10000），尤其适用于高丰度目标蛋白的检测；多克隆抗体因包含多种抗原识别位点，浓度通常略高，多为 1-10 μg/mL（稀释比例约 1:500-1:5000），在低丰度蛋白检测中表现更优。优品生物自主研发的 WB 一抗经过严格效价验证，在上述浓度范围内可稳定呈现清晰条带，且背景信号低，减少了后续优化的工作量。

二抗浓度的设定则需与一抗匹配，常规稀释比例为 1:5000-1:20000（对应浓度约 0.01-0.1 μg/mL）。对于 HRP 标记的二抗，若采用化学发光检测系统（灵敏度较高），浓度可偏向 1:10000-1:20000；若使用显色底物（灵敏度较低），则可适当提高至 1:5000-1:10000。优品生物提供的二抗均标注了针对不同检测方法的推荐浓度，方便科研人员直接参考。

二、浓度调整的关键依据：从实验细节出发的灵活优化

在实际操作中，常规浓度并非一成不变。优品生物通过总结大量客户反馈发现，以下因素是浓度调整的核心依据，需针对性优化：

目标蛋白丰度：若目标蛋白为低丰度（如某些信号通路蛋白），可将一抗浓度提高 20%-50%，同时适当提升二抗浓度以增强信号；若为高丰度蛋白（如管家基因蛋白），则可降低一抗浓度至常规范围下限，避免条带过浓导致的拖尾或背景干扰。

样本类型差异：对于组织样本中脂肪、核酸等杂质较多的情况，一抗浓度可提高 10%-30%，并配合加强封闭步骤；细胞样本纯度较高时，按常规浓度即可获得理想结果。优品生物建议，处理特殊样本（如植物组织、血清）时，可先进行预实验确定最佳浓度。

抗体批次差异：即使是同一抗体，不同批次的效价可能存在细微差异。优品生物在抗体生产中严格控制批次一致性，但仍建议首次使用新批次抗体时，以常规浓度为基准，做 1:2 梯度稀释预实验，确保浓度适配。

检测系统灵敏度：当使用高灵敏度化学发光仪时，二抗浓度可下调至 1:20000-1:50000；若采用普通 X 线胶片检测，二抗浓度可维持在 1:5000-1:10000，避免信号过弱。

三、优品生物的实操建议：让浓度调整更高效

基于对 WB 实验的深度理解，优品生物总结出一套高效的浓度调整方案：首次实验可采用 “常规浓度 ±50%” 的三梯度设置（如常规 1 μg/mL 时，同步测试 0.5 μg/mL、1 μg/mL、1.5 μg/mL），通过对比条带清晰度与背景值，快速锁定最优浓度。此外，优品生物提供的 WB 抗体套装中，均附带详细的浓度调整指南，针对不同实验场景给出具体建议，帮助科研人员少走弯路。