想做好PLA实验？样本准备是关键！这份全流程指南请收好

想要一张高分辨率的蛋白互作定位图？

想揭示组织、细胞中“谁在和谁说悄悄话”？

PLA技术（Proximity Ligation Assay）正是你寻找的答案！

但很多实验“挂掉”并非技术问题，而是——样本不合格！

为了帮助大家更高效、安全地完成PLA实验，我们整理了一份「PLA样本准备全流程指南」让您一次上手不踩坑！

样本要求&运输汇总

FFPE 样本石蜡样本：

（1）组织固定要求（FFPE 蜡块与 FFPE 切片都适用）

组织离体时间：缺血离体时间不宜超过 1h，组织块离体后应尽快固定。

组织固定液：推荐 10% NBF 或 4% PFA，10% NBF 穿透力强，4% PFA 穿透力弱一些。

固定时间：根据组织块大小而不同，0.5cm 直径组织块一般 18-24h。固定时间不宜太长，例如几天，几周，甚至几个月。

保存：存放于干燥器中，常温保存。

（2）石蜡切片标准

切片来源蜡块需满足（1）要求；

区域位置：避免用蜡块最表面切片，选用中部组织;

推荐切片厚度：5μm，越薄越好;排列整齐编号入玻片盒，做好封口处理。

FF 样本准备标准（冰冻组织）：

（1）冰冻组织块（FF样本块）

速冻处理：组织离体后立即使用液氮或异戊烷冷冻;使用OCT包埋剂完全包埋；-80°C冷冻保存，确保冻存状态稳定。

（2）FF切片要求：使用冷冻切片机制备;切片后立即贴片到玻片中央区域（远离磨砂边）;

推荐厚度5-10μm，切完即风干并用固定液固定5-10min；切片后用OCT覆盖组织块切口，防止干燥;

保存时限：-80°C储存不超过14天，优选新鲜切片。

细胞爬片：

（1）细胞贴壁与培养容器：建议使用玻片底板、玻片或专用细胞爬片载玻片；可选六孔板、十二孔板等，建议标注编号并正面朝上贴片。

（2）固定：细胞培养结束后，使用4% PFA室温固定10–15分钟;固定后立即用PBS漂洗 2–3 次，去除残留固定液。

（3）保存：固定后的细胞爬片可直接保存在PBS中，并封膜密封；保持水平存放，避免干片和气泡。

PLA技术能将蛋白互作信号精准“点亮”在显微镜下，但这一切的基础，离不开科学、规范的样本准备。

从组织固定到切片厚度，从抗体信息到运输条件，每一步都关乎最终结果的可信度与可重复性。

我们希望这份指南不仅能帮助您顺利开展实验，更能助力您的科研成果迈向更高水平。