WB加样原理

Western blot（WB）加样是将处理好的蛋白样品加入到电泳凝胶的上样孔中，为后续的电泳分离和蛋白检测做准备。

加样原理：1蛋白提取：从细胞或组织中提取总蛋白，使用裂解液裂解细胞，释放蛋白。

2蛋白定量：通过BCA法等方法测定蛋白浓度，确保每个上样孔中加入的总蛋白质量相同

3蛋白变性：加入上样缓冲液（loading buffer），使蛋白变性，消除电荷差异，便于电泳分离。

上样：将变性后的蛋白样品加入到电泳凝胶上的上样孔上，同时加入蛋白分子量标准（marker）作为参考

加样注意事项：

上样前：上样前需将所有蛋白样品充分混匀，涡旋震荡数秒后，用离心机离心

上样时：上样时抵住短玻璃板，稍倾斜接触液面再匀速加入到孔梳中，可减少气泡产生

上样后：上样后需尽快进行电泳，避免样品在上样孔扩散。