如何快速鉴定小鼠单抗IgG亚型?优品试剂盒一步解决

  1. 将待鉴定的小鼠单抗样本用适当的缓冲液进行简单稀释,确保抗体浓度在检测范围内。如果是小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等样本,如有需要可进行稀释和预处理,以满足检测要求。
  2. 加样操作:使用移液器吸取 10-15μL 稀释后的样本,缓慢滴加到检测试纸条的加样孔中。
  3. 结果判读:加样后,在 5-10 分钟内进行结果观察。若仅在质控线(C 线)出现一条红色条带,表明检测无效;若在质控线(C 线)和某一检测线(T 线,如 T1 代表 IgG1、T2 代表 IgG2a 等)同时出现红色条带,则对应检测线所代表的 IgG 亚型即为样本中抗体的亚型;若质控线(C 线)和所有检测线均未出现条带,也表明检测无效。

此外,优品生物基于酶联免疫吸附试验(ELISA)原理的小鼠单克隆抗体 IgG 六种亚型鉴定试剂盒,也能快速鉴定小鼠单抗 IgG 亚型3。其操作流程如下1:

  1. 样本准备:收集小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等样本,如有需要可进行稀释和预处理。如杂交瘤细胞上清可稀释至 1:100,腹水可稀释至 1:100000,纯化抗体可稀释至 200ng/mL。
  2. 加样:将处理后的样本加入到预包被的酶标板中,同时设置标准品孔和空白对照孔。
  3. 孵育:将酶标板在适当条件下孵育,使样本中的抗体与包被的特异性抗体充分结合。优品生物试剂盒推荐 37℃快速反应体系,一抗孵育可缩短至 30 分钟。
  4. 加标记抗体:加入 HRP 标记的二抗,再次孵育,使二抗与结合在板上的抗体特异性结合。其一步法孵育设计可将一抗与 HRP 标记二抗预先混合,孵育时间从传统 2 小时缩短至 45 分钟。

  5. 显色和终止:加入显色底物(如 TMB),等待显色反应发生,随后加入终止液终止反应。含增强剂的 TMB 底物可在 5 分钟内显色,避免过度孵育导致的背景问题。
  6. 结果分析:使用酶标仪在特定波长下读取各孔的吸光值(OD 值),通过与标准曲线对比,确定样本中 IgG 各亚型的含量和浓度,从而判断抗体的亚型。

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作者:玉兰
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来源:TechFM
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