生物素化靶点蛋白能用在哪些方面？

生物素标记

什么是生物素？

生物素是由植物或者原核生物生产的一种可溶性小分子物质，可与卵白素或链霉素亲和素 通过非共价结合，结合力Kd值高达10^-15mol/l。生物素与亲和素的结合能力是抗原抗体结合的100万倍。

生物素由咪唑酮环和噻吩环组成，与亲和素结合的主要是咪唑酮环，而噻吩环侧链末端的羧基则结合抗体和其他大分子物质。

生物素-亲和素系统的应用

组织化学

免疫荧光、免疫放射技术、胶体金技术

分子生物学、基因表达调控

生物素标记蛋白应用实例

抗体亲和力成熟-ELISA

Immobilized Human SIRP-α Fc Chimera, Human (Cat. No. UA010005) at 1 μg/mL (100μL/well) can bind Biotinylated Human CD47 Fc Chimera (Cat. No. UA010007) with EC50 of 0.067 μg/ml.

案例：SIRP固定，将生物素化CD47梯度稀释检测两者的结合能力。

案例：在一篇研究人GM-CSF抗体体外亲和力成熟的文献中，作者采用受体抑制ELISA的方法验证GM-CSF与四种抗体和GM-CSFR-alpha链互斥。结果表明抗体与GM-CSF的结合阻止了其余GM-CSFR的结合，亲本MOR03929表现出较低的受体抑制性(IC50-50pM)。

CAR-T-FACS检测

CD19是CAR-T研究的重要靶点之一，作为免疫球蛋白超家族的1型跨膜蛋白，CD19仅在B细胞中表达，通过B细胞受体依赖性和非依赖性调节B细胞的发育。

案例：文献中，在监控使用获批CAR-T药物的患者血液状况时，为了进行CAR-T计数，研究者使用重组生物素化Fc标签CD19标记细胞，然后用藻红蛋白标记的链霉亲和素染色，接着将包括CD3在内的经典T细胞表面标记用抗体标记。之后裂解红细胞，进行流式分析。

生物药-Biopanning

案例：在“Isolation and Characterization of Single-Domain Antibodies from Immune Phage Display Libraries”文中，作者为了筛选得到靶点蛋白VHHs，在biopanning过程中，将链霉亲和素提前包被在96孔板上，接着用生物素化靶点蛋白与链霉亲和素结合固定靶点蛋白。每孔加入1012噬菌体库后将未结合和结合的噬菌体分别洗脱下来，多次循环筛选后得到适合VHHs。

除了以上ELISA、FACS、Biopanning的应用，生物素标记蛋白的应用方向更包括SPR检测、BLI检测、纯化富集等实验。

纯度：>95% by SDS-PAGE

Immobilized Human SIRPα Fc Chimera (Cat. No. UA010005) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated CD47 His Tag, Human with EC50 of 0.063 μg/ml.

生物素化靶点蛋白能用在哪些方面？