实验室常用器皿的洗涤与消毒：消毒方法篇

#实验室器皿如何选用、洗涤、消毒?#

洁净无菌的实验室器皿是实验数据准确性和可重复性的根本保障。了解常用器皿及其规范化的洗涤消毒流程，是每一位实验人员必备的基础技能。上次讲过器皿洗涤方法，今天小编将针对实验室常用器皿、消毒方法做系统介绍。

一、 实验室器皿常用消毒灭菌方法

消毒（消除病原微生物）和灭菌（杀灭所有微生物，包括芽孢）是确保实验无菌环境的关键。

1、化学消毒法：

浸泡消毒： 使用消毒剂（如75%乙醇、含氯消毒液如次氯酸钠溶液、过氧乙酸、戊二醛等）浸泡器皿一定时间。适用于不耐热的塑料、橡胶制品、工作台面擦拭等。

擦拭消毒： 用消毒液润湿的无菌布擦拭器皿外表面或大型设备表面。

关键点： 严格遵循消毒剂浓度、作用时间要求； 消毒后必须用无菌水彻底冲洗干净，避免化学残留干扰实验；注意消毒剂的腐蚀性和毒性。

2、干热灭菌法：

原理： 利用高温干热空气（160-180°C，1-2小时）使微生物氧化或炭化。

适用： 玻璃器皿、金属器械（手术刀、镊子、剪刀）、陶瓷制品、粉末、油类、凡士林等不耐湿热或无法用高压蒸汽灭菌且耐高温的物品。不适用于液体、橡胶、塑料及大部分织物。

操作： 物品洗净干燥后放入烘箱（灭菌器），设定温度和时间。物品摆放不宜过挤。灭菌结束待温度自然降至60-80°C以下再开门取出，以防玻璃炸裂。

3、高压蒸汽灭菌法（高压灭菌锅）：

原理： 利用饱和水蒸气在密闭的高压锅内产生高温（通常121°C或134°C）和高压力（通常103 kPa或206 kPa），使微生物的蛋白质等生物大分子发生不可逆的变性凝固，从而达到彻底灭菌的效果。是实验室最常用、最可靠的物理灭菌方法。

适用： 绝大多数耐高温高压和湿热的物品，如：玻璃器皿（试管、培养皿、锥形瓶等）、手术器械、培养基、缓冲液、生理盐水、实验服、橡胶塞（硅胶塞）、某些特定耐高温塑料（如PP、PCF）制品、废弃培养物等。

操作步骤：

准备： 将洗净并沥干（或适当包裹，如用牛皮纸、灭菌袋）的物品合理装载于灭菌篮/锅内。确保物品间有足够空隙，利于蒸汽穿透。液体容器（如培养基瓶）装量不超过2/3，盖子拧松或使用透气封口膜。

加水： 向灭菌锅外锅/夹层中加入足量的蒸馏水或去离子水（水位达到标记线）。避免使用自来水，以防产生水垢。

密封： 盖好锅盖，按对角顺序均匀拧紧密封螺栓，确保密封良好。

排气（冷空气排除 - 至关重要！）： 设定灭菌程序或手动操作。加热升温，打开排气阀，让锅内的冷空气彻底排出。待有大量纯蒸汽持续喷出（无间断）1-2分钟后，关闭排气阀（或设备自动关闭）。冷空气残留是导致灭菌失败最常见的原因！

升温升压灭菌： 关闭排气阀后，锅内压力和温度迅速上升。当达到预设灭菌条件（通常为121°C， 103 kPa， 或134°C， 206 kPa）时，开始计时（通常液体/培养基121°C 15-20分钟，器械/器皿121°C 20-30分钟，特殊物品按需求调整）。

灭菌结束与排气：

固体/干燥物品： 灭菌时间到后，切断热源，让压力自然降至零（压力表指针回零），再缓慢打开排气阀（若有残余蒸汽需小心排放），最后打开锅盖取出物品。立即自然冷却或烘干。

液体： 灭菌时间到后，切断热源，让压力自然降至零（非常重要！）。绝对禁止在压力未完全降至零前强行打开排气阀或锅盖！ 否则液体会因压力骤降而剧烈沸腾喷出，造成严重烫伤和污染。压力降至零后，再缓慢微开排气阀（若有），最后开盖。液体取出后在室温下缓慢冷却。

干燥与取出： 对于固体物品，可稍微开启锅盖缝隙利用余热烘干，或取出后放入烘箱短时烘干。小心取出物品，避免烫伤。

注意事项：

l 安全第一： 严格遵守操作规程。压力未降至零前严禁开盖！定期检查安全阀、压力表是否正常。

l 有效排气： 确保冷空气彻底排尽，是灭菌成功的关键。

l 合理装载： 避免过载，物品间留空隙，包装不宜过紧。

l 水质： 使用蒸馏水或去离子水，减少水垢。

l 监测： 定期使用化学指示胶带/标签（变色）和生物指示剂（嗜热脂肪芽孢杆菌）验证灭菌效果。

l 维护： 定期清理灭菌锅内的水垢和污物。

二、 洗涤与消毒后的处理

干燥： 洗净或灭菌后的器皿必须充分干燥。常用方法有：空气中倒置自然晾干（洁净环境）、烘箱烘干（60-80°C）、超净台风干（用于无菌操作前）。

储存： 干燥后的洁净器皿应储存在清洁、干燥、无尘的柜子或容器中。无菌器皿应保存在无菌包装内或超净工作台/无菌室内，并在有效期内使用。

三、 质量检查

洁净度： 目视检查器皿内外壁是否光洁、无污渍、无划痕（影响观察）、无残留水珠（挂水珠表明未清洗干净或有油脂残留）。

无菌性： 通过培养基无菌试验或生物指示剂培养来验证灭菌效果。